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25/04/2019

Síntese do colágeno na aplicação de Radiofrequência (Spectra Tonederm)

Síntese do colágeno na aplicação de Radiofrequência (Spectra Tonederm)

Radiofrequência preserva
histoarquitetura e melhora a síntese de colágeno
na lesão de um tendão em experimento

 

Flavia Emi Akamatsu1, Samir Omar Saleh2, Flávio Hojaij3, Carlos Augusto Real Martinez4, Mauro Andrade1, Walcy Rosolia Teodoro5 and Alfredo Luiz Jacomo

1Departamento de Cirurgia, Laboratório de Investigação Médica-Divisão de Topografia Estrutural Humana, Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP), 2Clínica Cirúrgica da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP), 3Departamento de Medicina Cirúrgica, Laboratório de Pesquisa Médica, Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP), 4Pós-Graduação em Programa de Ciências da Saúde da Faculdade de Medicina da Universidade São Francisco (USF), Bragança Paulista-SP e 5Divisão de Reumatologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP), Brasil.

Resumo. Investigamos a ação da radiofrequência (RF) no processo de cicatrização após induzir lesões experimentais do tendão de Aquiles em ratos. Ratos Wistar foram submetidos cirurgicamente a seccionamento transversal parcial bilateral do tendão de Aquiles. O tendão direito foi tratado com radiofrequência (RFT), enquanto o tendão esquerdo serviu como controle (CT). No terceiro dia de pós-operatório, os ratos foram divididos em três grupos experimentais, constituídos por dez ratos cada, que foram tratados com radiofrequência monopolar (TonedermTM) até serem sacrificados no 7º, 14º ou 28º dias. Os espécimes histológicos foram estudados quanto ao conteúdo de células inflamatórias, tipos de colágeno I e III, imunomarcação e morfometria. O colágeno total foi analisado bioquimicamente e utilizado para avaliar a proliferação de fibroblastos e miofibroblastos pelos métodos imunohistoquímicos de vimentina e α-actina de músculo liso.

A análise estatística foi realizada utilizando o teste t de Student, o teste do sinal e o teste de Kruskal-Wallis para comparar tendões com radiofrequência com o tendões não tratado(α=5%; α=10%). Quantidades maiores de colágeno I com conteúdo de hidroxiprolina e células miofibroblásticas foram claramente evidentes dentro de 7 dias (p<0.05). 
Nenhuma diferença foi observada no conteúdo de células inflamatórias entre os grupos. Encontramos um melhor arranjo de colágeno com a administração de RF ao longo do tempo estudadoA administração de radiofrequência preserva a histoarquitetura e melhora a síntese de colágeno durante as fases iniciais da cicatrização, sugerindo que o tratamento pode proporcionar uma maior rigidez durante as fases mais vulneráveis ​​da cicatrização tendínea. O estudo clínico pode incluir RF entre as ferramentas terapêuticas no tratamento de lesões tendíneas.

Solicitações impressas para: Dra. Walcy Rosolia Teodoro, Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, Disciplina de Reumatologia, Av. Dr. Arnaldo 455, sala 3124, CEP 01296-903, São Paulo, SP, Brasil. e-mail: matrix@lim17.fm.usp.br DOI: 10.14670/HH-11-660

Palavras-chave: Tendão, Colágeno, Cicatrização, Radiofrequência

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Introdução

Lesões de tendão são comuns em adultos, necessitando de mais de 300.000 reparos de tendão cirúrgico a cada ano nos Estados Unidos (Pennisi, 2002). Essas lesões não são apenas responsáveis ​​por grandes custos de assistência médica, mas também resultam em perda de tempo de trabalho e morbidade individual (Dunning et al., 2010). Infelizmente, os tendões curam mal devido ao seu potencial regenerativo limitado, e muitos reparos exigem revisão (Sharma e Maffulli, 2005). Além disso, a recuperação após o reparo do tendão pode ser prolongada, variando de meses a anos e, na melhor das hipóteses, os tendões cicatrizados retêm 60% de suas propriedades mecânicas iniciais.

A lesão do tendão pode resultar não apenas na privação da mobilidade ou na cinemática articular anormal, mas também pode causar danos aos tecidos adjacentes, como a cartilagem, que pode levar à morbidade, dor e osteoartrite. Por exemplo, inchaço relacionado à lesão e aumento da pressão local sobre um tendão podem impedir o fluxo sanguíneo na área adjacente. Lacerações e rupturas são duas lesões comuns nos tendões, e ambas ocorrem frequentemente em situações atléticas. Uma vez machucados, tendem a sofrer um processo de cura lento e espontâneo, e às vezes é necessária uma intervenção cirúrgica para facilitar esse processo. No entanto, os tendões tendinosos apresentam propriedades mecânicas inferiores aos tendões intactos. Consequentemente, os tendões reparados correm risco de reincidência no local do reparo.

Outra consequência negativa comum da cicatrização de tendões é a formação de aderências (Wong et al., 2009). Os tendões são compostos de tecido conjuntivo que consiste de uma matriz paralela de fibras de colágeno e fibroblastos alongados ou fibrócitos que formam uma matriz extracelular altamente ordenada. As moléculas de colágeno se agrupam em fibrilas de colágeno filamentosas, consistindo de múltiplas microfibrilas (Ottani et al., 2001), que se agregam para formar fibras de colágeno. Todos os níveis estruturais hierárquicos dessas fibras, os principais componentes estruturais, estão alinhados paralelamente ao longo eixo do tendão, tornando o tendão ideal para transportar e transmitir grandes cargas mecânicas de tração. (Provenzano and Vanderby, 2006). Alterações degenerativas têm sido responsáveis ​​pela ruptura total do tendão de Aquiles humano, apoiada em estudos histológicos de tendões nos quais a orientação anormal das fibras de colágeno, alterações na composição do colágeno e nos tecidos mucoides e lesões hipóxicas foram implicadas. (Kannus and Józsa, 1991; Kannus et al., 1998). A cicatrização do tendão ocorre em três fases sobrepostas. Na fase inflamatória inicial, os eritrócitos e as células inflamatórias, particularmente os neutrófilos, entram no local da lesão. Nas primeiras 24 horas, predominam monócitos e macrófagos e ocorre fagocitose do material necrótico. Todos os níveis estruturais hierárquicos dessas fibras, os principais componentes estruturais, estão alinhados paralelamente ao longo eixo do tendão, tornando o tendão ideal para transportar e transmitir grandes cargas mecânicas de tração. Os fatores vasoativos e quimiotáticos são liberados com aumento da permeabilidade vascular, o início da angiogênese, a estimulação da proliferação de tenócitos e o recrutamento de mais células inflamatórias (Murphy et al., 1994) bem como o início da síntese de colágeno tipo III (Ippolito et al., 1980; Lin et al., 2004). Dentro de aproximadamente 6 semanas, o estágio de remodelação começa. Durante esta fase, o tecido de cicatrização é redimensionado e remodelado. Uma diminuição correspondente na síntese de celularidade, colágeno e glicosaminoglicano ocorre (Murphy et al., 1994; Samuel, 2009). Estratégias recentes de regeneração tecidual visam melhorar o resultado do reparo do tendão. Neste estudo, optamos por utilizar o modelo de lesão do tendão de Aquiles em coelhos relatado por Tibor et al. (2012) que foi modificada para ratos, em que a intensidade da lesão é expressiva, permitindo a avaliação de diferentes abordagens terapêuticas com homogeneidade de resultados.

A administração de radiofrequência (RF) produz calor devido ao atrito molecular causado por mudanças de polaridade, e seu uso terapêutico na redução de um local (Tasto et al., 2003). Esta abordagem terapêutica tem sido utilizada durante a cirurgia nos tendões patelares de coelhos (Hecht et al., 1999; Tibor et al., 2012) para diminuir o tecido de colágeno redundante através dos efeitos da energia térmica e aumentar a estabilidade da articulação. A influência do encolhimento nas propriedades biomecânicas do tecido colágeno foi avaliada neste modelo (Hecht et al., 1999; Pötzl et al., 2004).

O efeito de RF foi observado em uma modalidade diferente de aplicação de coblation e ablation via angiogênese para regular uma variedade de fatores de crescimento, tais como fator de crescimento endotelial vascular e proteínas das membranas celulares.; contudo, este efeito não foi observado em modalidades não ablativas (Tasto JP et al., 2003). Angiogênese potenciadores de ablação por RF no início estágios de cura e produz um retorno mais rápido à integridade mecânica dos tendões de Aquiles dos coelhos(Tibor et al., 2012). Essa integridade mecânica observada pode estar relacionada ao efeito do manejo de RF no arranjo e orientação das fibras de colágeno, bem como na síntese e quantidade de diferentes tipos de colágeno. Nosso objetivo é o efeito da administração não-ablativa de FR sobre a síntese de colágeno e medir o remodelamento do colágeno I e do colágeno III após 7, 14 e 28 dias após a lesão experimental. Esses dados contribuirão para o uso da administração de RF como terapia para lesões do tendão de Aquiles.

Métodos e Materiais

Animais e protocolo experimental: este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para Análise de Projetos de Pesquisa do Protocolo nº 164/10. Todos os animais foram submetidos aos protocolos experimentais dos Princípios Éticos em Experimentação Animal adotados pela Associação Brasileira de Ensaios em Animais.

Sessenta Rattus norvegicus albinus machos adultos, Wistar, pesando entre 250 e 300 g, foram alojados nas instalações da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Cinco animais foram alojados por gaiola e receberam comida e água da torneira purificada ad libitum. Os animais foram operados no CEPEC (Centro de Estudos e Pesquisas Clínicas, Departamento de Urologia da Faculdade de Medicina). Para o experimento, o tendão de Aquiles direito foi selecionado; os tendões de Aquiles esquerdos dos mesmos animais foram usados ​​como controles. Os ratos foram colocados sob anestesia geral com isoflurano a 4% e mantidos anestesiados por máscara utilizando uma fracção de isoflurano a 1,5-3%. Após a anestesia, as porções distais das pernas direita e esquerda do animal foram submetidas à desinfecção com solução de gluconato de clorexidina 10 mg / l e raspadas.

Os animais foram colocados em um campo estéril em uma mesa cirúrgica aquecida e cobertos com um pano cirúrgico estéril. A pele foi cortada longitudinalmente a 0,5 cm da inserção do calcâneo lateral ao tendão; ambos os peritendons e tendões foram expostos. Os animais foram submetidos cirurgicamente a seccionamento transversal parcial bilateral do tendão de Aquiles. A lesão nesse modelo animal foi realizada por dissecção e hemisecção transversa com o uso de um não. 15 lâmina de bisturi perpendicular às fibras de colágeno, 2,5 mm da inserção de Aquiles no lado lateral do tendão de Aquiles. Nós tomamos o cuidado de separar o flexor longo do hálux, que é medialmente adjacente ao tendão de AquilesApós a transecção, a pele foi fechada por uma sutura contínua com Prolene 0-6 (Ethicon). Após a cirurgia, os ratos foram mantidos aquecidos até recuperar a consciência. Os ratos receberam analgésicos (200 mg / kg de paracetamol) por via oral a cada 24 horas durante três dias. Os ratos ficaram sem imobilização. Durante o tempo em que foram mantidos, foram aclimatados a ciclos de 12 horas claro-escuro. No terceiro dia pós-operatório, os ratos foram divididos em três grupos experimentais e tratados com RF monopolar (TonedermTM) ajustado para 650 kHz e 2 W por dois minutos duas vezes por semana até serem sacrificados no 7º, 14º ou 28º dia. A área de contato para administração de RF foi circular com uma área de 0,78 cm2 e um diâmetro de 10 mm para contato com o tendão do animal. Após o tratamento, os animais foram eutanasiados utilizando câmara de CO2. Os animais foram colocados em câmaras previamente preenchidas com gás puro ou, preferencialmente, gás com 30% de oxigênio adicionado para reduzir o estresse causado pela hipóxia. Como o CO2 é duas vezes mais pesado que o ar, ele fica no fundo da câmara e a abertura da câmara é orientada para o topo. A letalidade do CO2 decorre da depressão do sistema nervoso central. Os animais foram mantidos na câmara por 10 minutos até que suas mortes fossem confirmadas (Nolen, 2009).

Preparação das Amostras

Os tendões de Aquiles foram coletados por dissecção, com o animal em decúbito ventral. Os espécimes foram coletados para análise histológica e de imunofluorescência e quantificação de colágeno. Para estudar os efeitos da RF na organização matricial, os tendões de Aquiles foram fixados por imersão em formalina tamponada neutra a 10%. Após descalcificação durante 1 a 4 dias com ácido nítrico a 7%, o tecido foi neutralizado embebendo-o numa solução de sulfato de sódio durante um dia e depois lavou-se durante 10 horas sob água corrente. As amostras de tendão foram cortadas de uma posição longitudinal. Depois de ser embebido em parafina, o tecido foi fatiado usando um micrótomo. De cada tendão, foram obtidas 6 fatias com espessura de 4-5 μm espaçadas a 50 μm. Secções finas foram coradas de acordo com o método de coloração dupla com hematoxilina e eosina (HE). A coloração de Picro-sirius foi realizada usando 0,2% de Sirius vermelho (Direct Red 80, C. I. 35780, Aldrich, Milwaukee, WI) (Dayan et al., 1989) diluído em solução saturada de ácido pícrico, que foi aplicado para observar a estrutura das fibras de colágeno. Secções subseriais adicionais de todos os blocos de parafina foram utilizados para imuno-histoquímica e imunofluorescência (Junqueira et al., 1982).

Histomorfometria do infiltrado inflamatório

Quantificar as células coradas, ao método estereológico de contagem de pontos (Gundersen et al., 1988) foi empregado utilizando um retículo formado por 100 pontos e 50 linhas, cada 25 μmde comprimento, adaptado a um microscópio convencional. Com 400× de ampliação, os tendões de Aquiles cobertos em cada campo foram calculados de acordo com o número de pontos que atingem o tecido conjuntivo como uma proporção da área total da grade. Então, contamos o número total de células dentro do tendão. As células inflamatórias foram quantificadas como o número de células presentes em cada campo dividido pela área de tecido. Os resultados finais foram então transformados em uma métrica de células / mm2 ajustando as unidades.

Imunofluorescência e imuno-histoquímica

A recuperação antigênica foi realizada por tratamento enzimático dos tendões de Aquiles com 4 mg / ml de pepsina bovina (10,000 U/ml) (Sigma Diagnostics, St. Louis, USA) Traduzir do inglês
em ácido acético 0,5 N seguido de incubação durante 45 minutos a 37 ° C. Em seguida, os deslizamentos foram incubados durante a noite com um anticorpo policlonal de coelho anti-humano Col I e ​​III [1:50 Sigma Chemical Co., Saint Louis, MO, EUA] produzido em nosso laboratório de acordo com as instruções anteriores de Miller e colegas (Millerand Rhodes, 1982). Para controles negativos, as seções foram incubadas com soro fetal bovino em vez do anticorpo primário. 
O mesmo tratamento de tecido foi utilizado para a detecção de imunofluorescência. As secções foram incubadas com o mesmo anticorpo primário, diluídas com PBS mais albumina de soro bovino a 1% durante a noite a 4 ° C numa atmosfera húmida. As secções foram então incubadas com imunoglobulina de cabra anti-coelho conjugada com isotiocianato de fluoresceína (FITC) (Sigma Chemical Co., diluição 1:50) como um anticorpo secundário e montadas num meio de montagem aquoso. A especificidade dos anticorpos foi validada por Western Blot. As fibras Col I e ​​III foram quantificadas nos grupos controle e experimental do tendão de Aquiles por meio de análise de imagem. Resumidamente, dois avaliadores cegos para o grupo de animais empregaram um sistema de análise de imagemque consistia de uma câmera Olympus montada em um microscópio Olympus que enviava as imagens para um monitor LG usando um sistema de digitalização controlado por computador (Pentium 1330 Mhz) (Oculus TCX, Coreco Inc, St. Laurent, Quebec, Canadá). As imagens foram processadas pelo software Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, EUA). Para cada tendão, dezesseis amostras do grupo controle e do grupo experimental foram analisadas com uma ampliação de 400x. As densidades de fibras de colágeno neste compartimento foram expressas como o número de fibras dividido pela área total estudada. Os resultados finais foram expressos como o número de fibras de colágeno por área total (Samuel, 2009). Para avaliar a vimentina nos tendões de Aquiles, secções de parafina de 4 μm foram imunocoradas com vimentina policlonal de cabra (1: 4000) (C-20 Santa Cruz Biotechnology Inc., sc-7557) e actina monoclonal anti-α de músculo liso (1: 5000) (Clone 1 a 4 Dako; A 2547) diluído em BSA. A estreptavidina foi usada em combinação com peroxidase de rábano silvestre biotinilado (Dako Corp., diluição 1: 1000) e tetracloridrato de diaminobenzidina no contexto da contra-coloração citoplásmica de Hematoxilina de Harris para detectar evidência de expressão antigênica pelas células.

Quantificação de colágeno usando 4-hidroxiprolina

O teor de colagénio foi determinado medindo o teor de 4-hidroxiprolina de acordo com Bergman e Loxley (1972). Os pesos secos das amostras liofilizadas (n = 40 para cada ponto de tempo) foram medidos, e as amostras foram transferidas para tubos de cultura de 13x100 mm (Corning, NY14831) contendo 5 ml de HCL 6N. Em tubos separados, quantidades 0 (em branco), 4, 6, 8, 10 e 12 μg do padrão 4-hidroxiprolina (Sigma) foram preparadas para estabelecer uma curva padrão para cada experiência. As amostras foram hidrolisadas a 100 ° C durante 22 horas e depois oxidadas adicionando reagente de cloramina-T e incubando-as à temperatura ambiente durante 25 min. Após a oxidação, um cromóforo foi desenvolvido adicionando os reagentes de Ehrlich a cada amostra e incubando-os a 65 ° C por 20 min. A absorvência de cada padrão e amostra foi medida a 560 nm por espectrometria. O conteúdo de colágeno foi calculado multiplicando-se o conteúdo de 4-hidroxiprolina por 7,0, como descrito anteriormente (Samuel, 2009). O teor de colagénio para cada amostra foi determinado dividindo o teor total de colagénio pelo peso total de cada amostra.

Análise estatística

Para as variáveis ​​quantitativas, as médias ± erros padrão dos resultados médios das amostras replicadas, ou de experimentos combinados quando a variação entre os experimentos permitiu a combinação confiável de dados brutos, foram comparadas. A comparação dos múltiplos grupos foi realizada por meio de análise de variância (ANOVA) seguida de post hoc de Bonferroni, teste t de Student, sinal de Kruskal-Wallis e teste de Kruskal-Wallis para comparação de tendões com RF com tendões normais e não tratados. Os procedimentos estatísticos foram realizados com o software estatístico SPSS, versão 17.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, EUA).

Resultados

Efeito do manejo de RF nas características histológicas dos tendões de cicatrização

A análise histopatológica mostrou que os grupos tratados com RF monopolar (RFT) após 7 dias apresentaram arquitetura normal, caracterizada por orientação paralela ou linear dos feixes de colágeno, baixo grau de vascularização e proliferação de fibroblastos (fig. 1D). Em contraste, os espécimes CT apresentaram uma distorção de arquitetura notável, que foi modificada por grandes áreas pálidas com o rompimento da orientação linear normal dos feixes de colágeno e caracterizada por um padrão ondulado de fibrilas (Fig. 1A). Não houve diferença significativa no infiltrado inflamatório entre os grupos CT e RFT em nenhum momento estudado (fig. 1B, D, F, H, J, L).

Esses resultados foram apoiados pela análise das fibras de colágeno no grupo RFT corado com picrosirium e observado sob luz polarizada após 7 dias, que apresentou um padrão mais linear durante a recuperação (Fig.1C) comparado com o grupo CT (Fig. 1A). No entanto, não houve diferença na avaliação morfológica entre os grupos RFT e CT aos 14 ou 28 dias.
Através da análise quantitativa usando 4- hidroxiprolina, o conteúdo total de colágeno no tendão
as amostras demonstraram ser significativamente maiores para o grupo RFT após 7 dias em comparação com o grupo CT (P <0,05); nenhuma diferença entre CT e os outros grupos foram encontrados (Fig. 3B).

Análise da expressão do músculo liso Col I, Col III, vimentina e α-Actina em tendões

A análise de imunofluorescência de colagéneo I demonstrou um aumento significativo na expressão de proteína ESTA no grupo RFT após 7 dias de tratamento (Fig. 2B), quando comparada com o grupo CT (Fig. 2A), corroborando os dados obtidos através do HE e picrosirius análises de coloração (Fig. 1A, C). A imuno-histoquímica para vimentina e músculo liso α-actina mostraram maior expressão de vimentina no grupo RFT após 7 dias em comparação com o grupo CT (Fig. 2C e D), confirmando os dados obtidos da análise HE que identificou os fibroblastos no danificado área (Fig. 1A, C). O músculo liso da α-actina apresentou características similares nos grupos RFT e CT neste momento. Além disso, a análise histomorfométrica dos tendões no Presente área danificada mostraram um aumento significativo na Col I (p <0,10) (Fig. 3A), está de acordo total, que com os nossos resultados relativos ao colagénio bioquímico (Fig. 3B). No entanto, nenhuma diferença foi observada entre os grupos CT e RFT para Col I em 14 ou 28 dias, e Col III não mostrou diferenças significativas em qualquer momento estudado.

 

 

Discussão

Este estudo mostra que a RF preserva a estrutura das fibras e estimula a síntese do colágeno tipo I na fase inicial mais vulnerável do processo de cicatrização do tendão. Encontramos um melhor arranjo de colágeno na administração de RF em todos os momentos estudados, sugerindo uma regeneração mais próxima a um tendão normal, que é o objetivo do arranjo de colágeno durante a cicatrização do tendão. Sete dias após a cirurgia, novas fibras de colágeno cresceram extensivamente no local do reparo em um arranjo aleatório; após catorze dias, as fibras de colágeno começaram a formar um aspecto morfológico axial (Sasaki et al., 2012). Esses resultados foram semelhantes aos encontrados por Sheffler et al. (2005a, b), que observaram intensa remodelação do colágeno após o tratamento com RF. O aumento no colagénio I matriz de expressão de proteína em tendões experimentais sete dias após a cirurgia indica que o RFTS eram mais duras do que as TCs no local de reparação, o que pode indicar um aumento da taxa de reparação durante a primeira semana, portanto, levando a uma menor susceptibilidade à ruptura. A predisposição tecidual à ruptura tem sido relacionada à produção de fibras finas, como o colágeno do tipo III (Maffulli et al., 2000; Satomi et al., 2008).

A quantidade de colágeno I foi maior após sete dias; assim, a administração de RF parece preservar colágeno I no tecido no início do processo de cicatrização do tendão, dando melhor estrutura à matriz colagenosa nessa fase vulnerável e sugerindo uma melhora na iscoelasticidade do tecido. A viscoelasticidade dos tendões resulta de proteínas colágenas, água e das interações entre colágenos e proteoglicanos (Purslow et al., 1998, Elliott et al., 2003). Por outro lado, a altas taxas de deformação, os tendões tornam-se mais rígidos e mais eficazes na transmissão de grandes cargas musculares ao osso (Wang, 2006). O colágeno tipo I aumentado após o tratamento com RF observado em nossos resultados histomorfométricos é de grande importância para a recuperação do tendão, pois esse tipo de colágeno é o principal constituinte das fibras espessas, além de promover a resistência de estruturas como tendões e ligamentos.

Fig. 1. Amostras de tendão obtidas do grupo de terapia de TC e RFT - ratos corados com picrosirius (A, C, E, G, I e K) e hematoxilina-eosina (B, D, F, H, J e L). Observe as orientações lineares e paralelas dos feixes de colágeno após 7 dias de tratamento (C, detalhe), indicadas por um aumento na birrefringência laranja-avermelhada e pela inflamação na região da lesão (D) quando comparadas com distorções de arquitetura em seus feixes de colágeno (A, detalhe) e células inflamatórias difusas (B) no grupo CT. Após os 14 (E e G) e 28 (I e K) dias, as orientações dos feixes de colágeno e das células inflamatórias dos grupos 14 (F e H) e 28 dias (J e L) foram semelhantes às do Grupo CT.

 

Fig. 2Imunofluorescência de colágeno I e imuno-histoquímica para vimentina e músculo liso de α-actina de amostras de tendão obtidas dos grupos controle (CT) e terapia de RF (RFT) de ratos. O grupo RFT mostra expressão intensa de colágeno I (B), caracterizada por um aumento de fibras grossas na área lesada em comparação com o grupo CT (A). Observe o aumento na expressão de vimentina na área lesada (D) no grupo de RFT em comparação com o grupo CT (C). Em contraste, a expressão do músculo liso da actina foi semelhante para os grupos RFT (E) e CT (F) para este período de tratamento.

Fig. 3. Análise morfométrica das fibras colágenas tipo I nos tendões submetidos à terapia por radiofrequência RFT (direita) CT (esquerda). As áreas de fluorescência verde para o colágeno tipo I foram quantificadas com aumento significativo no colágeno I após 7 dias da administração do RFT; * p <0,10.

Além disso, a expressão aumentada de vimentina Observado na lesão após 7 dias de tratamento com RF, mostrando a proliferação de fibroblastos Isso foi estimulado na região avaliada, o que mais uma vez pode explicar a expressão aumentada de colágeno I observado em nosso estudo. Além disso, o músculo liso da α-actina na mesma região foi equivalente entre os grupos, sugerindo que a administração de RF pode estimular a síntese de colágeno sem alterar os fenótipos das células. Estes resultados optimizar o uso de RF como uma terapia inicial no processo ECUPERAÇÃO tecido para alterar Porque na quantidade de α-actina seria esperado fibrose do músculo liso a seguir occur.we injuryshould não detectar o envolvimento de RF em Processos theinflammatory da Estudou células.Observações deste fenômeno têm sido inconsistentes na literatura; anteriormente, quando os lasers usavam tendões e pele, eles resultaram em diminuição da dor (Laraia et al., 2012) e aumento da inflamação (Choi et al., 2013). Tais achados discrepantes podem ser explicados pelas diferenças entre estímulos e protocolos de aplicação, que provavelmente terão uma grande variação. Apesar da existência de poucos estudos conclusivos utilizando terapia de RF para recuperação de tendões, sugerimos outro método terapêutico para recuperação de tendões lesionados, principalmente nos estágios iniciais do processo de cura, que é a fase mais vulnerável de regeneração. O gerenciamento de RF permanece muito específico devido a resultados controversos e variados e, especialmente, devido à falta de um protocolo de aplicação.

Referências

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Fig. 3. Morphometric analysis of type I collagen fibers in the tendons submitted to radiofrequency therapy RFT (right) CT (left). The green fluorescence areas for type I collagen were quantified with significant increase in collagen I after 7 days of RFT administration; *p<0.10. normal achilles tendons. An in vitro model of human tendon healing. Am. J. Sports Med. 28, 499-505.

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Aceito em 4 de setembro de 2015